文章目录

1 材料与方法

1.1 标本来源与试剂

1.2 ADSCs细胞培养及外泌体分离

1.3 RA-FLS细胞培养及转染

1.4 RT-qPCR

1.5 Western blotting

1.6 CCK-8

1.7 Transwell

1.8 双荧光素酶报告

1.9 统计学分析

2 结果

2.1 成功分离ADSCs细胞外泌体

2.2 ADSCs细胞外泌体抑制RA-FLS细胞增殖、迁移和侵袭

2.3 ADSCs细胞外泌体上调RA-FLS细胞中miR-212-3p的表达

2.4 miR-212-3p靶向下调SMAD1的表达

2.5 ADSCs细胞外泌体miR-212-3p通过SMAD1抑制RA-FLS细胞增殖、迁移和侵袭

3 讨论

文章摘要:目的探讨脂肪间充质干细胞(ADSCs)外泌体miR-212-3p对类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞RA-FLS增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法收集海南医学院第一附属医院类风湿性关节炎(RA)患者和健康者血清各20例,采用RT-qPCR检测血清中miR-212-3p的表达情况。体外细胞可分为4组:RA-FLS细胞单独培养(NC组)、RA-FLS细胞+Exo-ADSCs共培养(Exo组)、RA-FLS细胞+沉默外泌体miR-212-3p共培养(Exo-antagomiR-212-3p组)、敲降RA-FLS细胞SMAD1+沉默外泌体miR-212-3p共培养(si-SMAD1+Exo-antagomiR-212-3p组)。外源性调节ADSCs细胞中miR-212-3p和RA-FLS细胞中SMAD1的表达水平后,将ADSCs外泌体与RA-FLS细胞共培养,CCK-8和Transwell分别检测RA-FLS细胞增殖活力、迁移和侵袭能力;采用双荧光素酶报告基因验证miR-212-3p与SMAD1之间的靶向关系。结果与健康者相比,miR-212-3p在RA患者血清中低表达,差异有统计学意义(P<0.05);与NC组相比,Exo组中miR-212-3p表达显著上调,增殖活力、迁移和侵袭显著降低,差异无统计学意义(均P>0.05);miR-212-3p能够靶向结合SMAD1的3′UTR;同时与NC组相比,Exo组及si-SMAD1+Exo-antagomiR-212-3p组中SMAD1相对表达、RA-FLS细胞增殖活力、迁移和侵袭数显著降低,差异无统计学意义(均P<0.05),而Exo-antagomiR-212-3p组中SMAD1相对表达、RA-FLS细胞增殖活力、迁移和侵袭数与NC组比较,差异无统计学意义(均P>0.05)。结论 ADSCs外泌体miR-212-3p在RA患者和RA-FLS细胞中低表达,其通过靶向下调SMAD1抑制RA-FLS细胞增殖、迁移和侵袭。

文章关键词:

论文作者:贾丙申 于鹏 焦拓 李君 李明 曲国欣 纪志华 付昆 

作者单位:海南医学院第一附属医院关节创伤外科 

论文DOI: 10.19930/j.cnki.jmdt.2021.10.039

论文分类号: R593.22

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